RESUMO O objetivo da presente pesquisa foi alcançado com a divisão da pesquisa em dois experimentos: (1) aperfeiçoar o protocolo de congelação utilizando água de coco em pó (ACP-104) como diluente para a criopreservação seminal de carpa comum; (2) avaliar o efeito da suplementação das vitaminas C (ácido ascórbico) ou E (α-tocoferol) sobre os melhores diluidores testados no experimento 1 na qualidade do sêmen pós-descongelado da espécie. Para o experimento 1, foram formados oito pools de sêmen, provenientes de 14 machos selecionados. As amostras seminais coletadas foram avaliadas quanto à motilidade total, à velocidade, ao percentual de espermatozoides normais e à vitalidade espermática antes e depois da criopreservação seminal. Esta foi realizada em meio ACP-104 acrescido de dimetilsulfóxido (DMSO), ou etilenoglicol (EG), ou glicerol, ou metanol, todos à concentração de 10%, diluídos em 1:3 (sêmen:diluidor). As amostras foram, então, congeladas em vapor de nitrogênio líquido em dry shipper e estocadas em nitrogênio líquido (-196°C). Para o experimento 2, foram formados oito pools provenientes da coleta de sêmen de 15 machos. As amostras seminais foram avaliadas seguindo as mesmas análises do experimento 1, acrescentando-se a duração da motilidade total. A criopreservação seminal utilizou-se do meio ACP-104 acrescido de DMSO ou EG, suplementado ou não com vitamina C ou E. Os melhores resultados encontrados no experimento 1 foram obtidos com o DMSO e o EG. Estes não diferiram significativamente entre si para a motilidade total (24% e 28%; P>0,05) e a normalidade espermática (32% e 26%; P>0,05), respectivamente. Para o experimento 2, o EG suplementado com vitamina E produziu significativamente resultados superiores de motilidade total, normalidade espermática e duração da motilidade em relação ao DMSO, concluindo-se que o EG deve ser, portanto, o crioprotetor de escolha a ser utilizado com o ACP-104 suplementado ou não com vitamina E.

ABSTRACT The objective was achieved by dividing the research into two experiments: (1) improving the freezing protocol using powdered coconut water (ACP-104) as a diluent for the cryopreservation seminal of common carp; (2) evaluating the effect of supplementation of vitamins C (ascorbic acid) or vitamin E (α-tocoferol) with the best extenders tested in experiment 1 on the quality of post-thawed. For experiment 1, semen pools from 14 selected males were formed. Seminal samples were evaluated for total motility, velocity, percentage of normal sperm and sperm vitality before and after the seminal cryopreservation. This was done in ACP-104 extender plus dimethyl sulfoxide (DMSO), or ethylene glycol (EG), or glycerol or methanol all at concentration 10% diluted in 1:3 (semen:extender). The samples were frozen in vapors of nitrogen into dry shippers and stored in liquid nitrogen (-196 °C). For experiment 2, eight pools were formed from the 15 males. The semen samples were evaluated following the same analysis of experiment 1 adding duration of total motility. The sperm cryopreservation was performed in extenders ACP-104 plus DMSO or EG supplemented or not with vitamin C or E. The best results found in Experiment 1 were obtained with DMSO and EG. They do not differ significantly for total motility (24% and 28%; P>0.05) and normal sperm (32% and 26%; P>0.05) respectively. For experiment 2, EG supplemented with vitamin E, produced significantly better results overall motility, sperm normality and duration of motility relative to DMSO. In conclusion, EG should be the cryoprotectant of choice for use with the ACP-104 supplemented or not with vitamin E.

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation.

Determinou-se a dose inseminante para fertilização artificial e descreveu-se o desenvolvimento embrionário de tambaqui (Colossoma macropomum). Os gametas foram coletados de reprodutores induzidos hormonalmente. Foi realizada fertilização artificial nas proporções de espermatozoides/ovócito de D1-50.666; D2-75.999; D3-101.332; D4-126.665; D5-151.998. O desenvolvimento embrionário foi acompanhado por meio de observações periódicas em estereoscópio até a eclosão dos ovos. Na fase de fechamento do blastóporo foi calculada a taxa de fertilização nas diferentes doses inseminantes. A porcentagem de fertilização aumentou de forma linear segundo a equação Ŷ =0,050 + 0,00000773X (R²=97,5), atingindo um platô em 84% na proporção de 102.486 espermatozoides/ovócito. Os embriões apresentaram segmentação meroblástica discoidal, típica de ovos telolécitos, com eclosão ocorrendo aos 357 horas-grau após a fertilização. Conclui-se que o desenvolvimento embrionário de tambaqui obedece ao esperado para peixes com ovos telolécitos e recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 100.000 espermatozoides/ovócito na rotina de fertilização artificial dessa espécie.

The objective of this research was to determine the insemination dose for artificial fertilization and describe the embryonic development of tambaqui (Colossoma macropomun). The gametes were collected from induced breeding hormonally. An artificial fertilization was performed with different sperm/oocyte ratios of D1-50666, D2-75999, D3-101 332, 126 665-D4, D5-151 998 sperm/oocyte. Embryonic development was monitored through periodic stereoscopic observations until hatching. When embryos reached the blastopore closure stage, the rate of fertilization in different insemination doses was calculated. A regression equation was estimated to determine the ideal proportion of the gametes. The fertilization rate increased linearly according to the equation Ŷ = 0.050 + 0.00000773 X (R² = 97.5), up to the proportion of 102.486 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 84%. The embryonic development of tambaqui was meroblastic discoidal, as expected from telolecithal eggs and we recommend the use of the insemination dose of approximately 100.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization of tambaqui.

The Amazonian fish known as tambaqui (Colossoma macropomum Cuvier, 1818) is a osseous fish and has high commercial value because of its meat quality and for recreational fishing. Tambaqui is one of the major species in the Amazon basin and found in most rivers and surroundings of Manaus city (Silva et al., 1984). The present study was carried out to evaluate sperm parameters from tambaqui, subjected or not to hormone treatment for a period of 12 months. We used 26 males with three years of age, raised at the Aquaculture Research Center of the National Department for Drought Control (DNOCS). Animals were identified with magnetic chips and divided into two groups: controls (NI) and hormone-treated (I), which received 2 mg of carp pituitary extract (CPEkg-1) of body weight (via intra celomic). Semen was collected 14 hours after hormonal induction and the following parameters evaluated: volume, pH, osmolarity and sperm concentration. Fishes had body weight of 5410 g, with total length and standard length of 68 cm and 59.17 cm, respectively. In the case of hormone-treated and control animals, we found the following criteria, respectively: semen volume of 5.05 mL and 0.55 mL (p<0.05); pH of 8.21 and 8.09; osmolarity of 320.51 and 323 mOsm/kg; sperm concentration of 22.93 x 10(9) and 40.46 x 10(9) sptz/mL (p<0,05). Total sperm productions were quantified as 115.79 x 10(9) sperm/mL in treated fishes and 22.25 x 10(9) sperm/mL in the controls. We conclude that treatment of adult tambaqui with carp pituitary extract increase semen volume but reduces sperm concentration while had no effect on sperm osmolarity and pH.

O tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) é uma espécie de teleósteo da bacia amazônica e abundante naquela região, de alto valor comercial e forte apelo culinário e esportivo sendo uma das principais espécies amazônicas com larga distribuição nos rios e nas áreas próximas a Manaus (Silva et al., 1984) Este trabalho teve por objetivo avaliar as características espermáticas do sêmen de tambaqui com e sem indução hormonal por um período de doze meses. Utilizou-se 26 machos com idade média de três anos, pertencentes ao Centro de Pesquisas em Aquicultura (CPAq) do Departamento Nacional de Obras Contra às Secas (DNOCS), devidamente identificados com chips magnéticos. Os animais foram divididos em dois grupos: induzidos (I) e não induzidos (NI). Os animais do grupo I receberam 2 mg de extrato de pituitária de carpa (EPC-1) por kg de peso vivo (PV), via intra celomática. O sêmen foi coletado após 14 horas através de massagem abdominal. Os parâmetros avaliados foram: volume, pH, osmolaridade e concentração espermática. Os peixes apresentaram peso médio de 5410 g, comprimento total de 68 cm e comprimento padrão de 59,17 cm. Para os grupos I e NI foram observados respectivamente: volume médio de 5,05 mL e 0,55 mL (p<0,05); pH médio de 8,21 e 8,09; osmolaridade média de 320,51 e 323 mOsm/kg e concentração espermática média de 22,93 x 10(9) e 40,46 x 10(9) sptz/mL (p<0,05). A produção espermática total foi de 115,79 x 10(9) sptz/mL no grupo I sendo de 22,25 x 109sptz/mL no grupo NI. Não houve diferença significativa entre os valores obtidos de osmolaridade e pH dos indivíduos induzidos e não induzidos. No entanto, a concentração espermática e o volume no grupo induzido apresentaram valores significativamente superiores (p<0,05) comparado aos indivíduos não induzidos.

The preservation of the goat genital organs with a fixed solution of paraformaldehyde 10% and a saturated solution of Bouin during 4, 8, 12 and 24 hours of fixation, included in paraffin and stained with hematoxylin-eosin was evaluated. The Bouin solution with four hours of fixation showed to be the best protocol of fixation for the ovary, oviduct, uterus and vagina, resulting in little tissue retraction and better cellular integration when compared to the other fixing times (8, 12 and 24 hours). The fixation with paraformaldehyde showed significant alteration in the tissue architecture of the oviduct and vagina. Althouh paraformaldehyde is not the most adequate solution for the goat genital system preservation, its use can be considered in the absence of Bouin solution.